样本的收集

液体样本的收集

1、血清：用无菌管收集，室温血液自然凝固 10-20 分钟，2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2、血浆：应根据标本的要求选择 EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分 钟后，2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收集上清，保存过程中如有 沉淀形成，应该再次离心。

3、尿液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) 。仔细收集 上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

4、胸腹水：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收 集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5、脑脊液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收 集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6、唾液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收集 上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

7、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

8、牛奶：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收集 上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

9、蜂蜜：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收集 上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

10、全血：用含有抗凝剂的无菌管收集，立即轻轻摇动，来回轻轻颠倒数次，使血液和 抗凝剂混匀， 以防血液凝固。

固体样本的收集

1、组织标本：切割标本后，称取 1g 组织，加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS，用手工 或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收集上清。分装一 份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。对于植物组织，不好匀 浆的话，就在液氮中充分研磨。

2、细胞内蛋白样本：许多待测蛋白不是分泌蛋白，而是存在于细胞内的蛋白，这个时

候，要先收集细胞，洗涤干净，再破碎细胞，离心取上清。

(1) 培养的细胞

A、动物细胞：用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀释细胞悬液，使细胞浓度达到 100 万/ml 左右。 通过反复冻融 (如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎) ，以使细胞破坏并放出 细胞内成份。2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。

B、植物细胞：用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀释细胞悬液，使细胞浓度达到 100 万/ml 左右， 置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎 2s，冷却 30s 的方式，充分破碎细胞，以使细胞破 坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收集上清， 保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

(2) 组织的细胞

切割标本后，称取 1g 组织，加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS，用手工或匀浆器将标 本匀浆充分。2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，去除上清，再用 pH7.2-7.4 左右的 PBS 小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。

3、细胞内蛋白样本：许多待测蛋白不是分泌蛋白，而是存在于细胞内的蛋白，这个时

候，要先收集细胞，洗涤干净，再破碎细胞，离心取上清。

4、咽拭子：加入 2ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS，溶解咽拭子头部，摇匀，用镊子取出 咽拭子并挤干液体，2-8℃条件离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分) ，仔细收集上清。分 装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白， 直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。

5、植物标本：取组织块 (0.2g~0.5g) 最少可到 5~10mg 在冰冷的 PBS 中漂洗，滤纸 拭干，准确称重，放入 5ml 的匀浆管中；按重量(mg):体积(ml)=1:9 的比例加入 9 倍体积的 匀浆介质于匀浆管中，冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块；匀浆的方式：手工匀浆， 机器匀浆。  ① 手工匀浆：左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆 垂直插入套管中，上下转动研磨数十次 (6~8 分钟) ，充分研碎，制成 20%的匀浆液。 ② 机 器匀浆：用组织捣碎机 10000~15000 转/分 上下研磨制成 10%组织匀浆，也可用内切式组 织匀浆机制备 (匀浆时间 10 秒/次，间隙 30 秒，连续 3~5 次，在冰水中进行,可适当延长 匀浆时间) ，镜检观察:取少量组织匀浆作涂片 (直接涂片、染色均可以) ，显微镜下观察 细胞是否破碎，若没有则可延长匀浆时间。将制备好的 10%匀浆液用普通离心机或低温低速 离心机 4000 转/分左右,离心 10~15 分钟，取上清液进行测定。

样本的要求

1、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2、不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的 (HRP) 活性。

3、以上是通用的样本处理方法，无法涵盖各种样本，对于一些特殊样本，建议实验人 员多参考已发表的文献， 自行设计合理的样本处理方法